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    轉基因品系馬鈴薯SEMT15-102 PCR試劑盒

    轉基因品系馬鈴薯SEMT15-102 PCR試劑盒

    產品時間:2020-08-04

    訪問量:351

    廠商性質:經銷商

    生產地址:進口、國產

    簡要描述:
    轉基因品系馬鈴薯SEMT15-102 PCR試劑盒低溫運輸,-20℃保存,保存期限為12個月。陽性對照需要因易污染其他成分需要單獨放置。本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供DN段作為陽性對照。
    品牌其他品牌CAS詳見說明書
    分子式詳見說明書純度詳見說明書
    分子量詳見說明書貨號GOYP63645
    規格50次供貨周期現貨
    主要用途公司產品僅用于科研應用領域化工
    產品名稱 轉基因品系馬鈴薯SEMT15-102 PCR試劑盒
    英文名稱 PCR kit semt15-102 for transgenic potato lines
    規格 50次

     

    產品優勢:
    1.隨時可用。
    2.優化的緩沖液可增強特異性并減少引物二聚體的形成。
    3.高靈敏度,特異性和可靠性。
    4.為不同的qPCR儀器提供了被動參考染料。

    使用方法:
    一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
    1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DN段作為陽性對照。
    2. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
    3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
    4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
    5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
    6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
    7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

    實驗過程:
    一、試劑準備
    1. DNA模板
    2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
    3.10×PCR Buffer
    4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
    5.Taq酶
    二、操作步驟
    1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
    dNTP mixl                 4μl
    引物1(10pM)               2μl
    引物2(10PM)              2μl
    Taq酶(2U/μl)            1μl
    DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
    加ddH2O至               50 μl
    視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
    2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。
    3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
    4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
    三、注意事項
    1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。設立一個的PCR實驗室。
    2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
    3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
    4.PCR試劑配制應使用高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
    5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
    6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
    7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。

    PCR實驗步驟:
    ①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
    ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
    ③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
    ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
    ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
    ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。

    儲存條件:
    僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
    1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
    2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
    3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
    4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
    5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

    VERO C1008 (E6)非洲綠猴腎細胞 VERO C1008 (E6) of African green monkey kidney cells DMEM培養基+10%FBSβ-D-半乳糖五乙酸酯(>98%,BR)質量規格:>98%,BRPentaacetyl-β-D-galactopyranose

    IFNA1 Protein Rat 重組大鼠 IFN-alpha / IFNA1 / IFN 蛋白 (His 標簽)人造沸石質量規格:Tech GradePermutit

    LLC-WRC 256(大鼠腹水癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CHL/IU [ CHL-11 ](中國倉鼠肺細胞)酚肽二1酸四鈉(>96%,BC)質量規格:>96%,BCPhenolphthalein diphosphate tetra salt

    原代上皮細胞培養特制添加劑Many types of cells包裝:5/2.5/1ml吩噻嗪(>98%,BR)質量規格:>98%,BRPhenothiazine

    BTK Others Human Bruton Tyrosine Kinase / BTK Kinase 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 秦皮甲素質量規格:HPLC98%,BREsculin

    BC-022(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠漿細胞瘤;MPC-11PHOSPHORAMIDON嶙酰二肽蛋白組學級5MG119942-99-3Frozen

    人結膜成纖維細胞總RNAHConF NA沒食子醋兒茶速沒食子醋酯(+4) (-)-Gcllocctqchin gcllctq 433-96-9

    CAT Others Human CAT / Catalase 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) L-脯安醋芐酯言醋鹽 L-Prolinq bqnzyl qstqr xy7nochloridq 60668-01-1

    豚鼠心肌細胞;GP-H1普魯蘭酶128℃,避光

    A-673細胞,橫紋肌瘤細胞 Hela細胞耐藥亞株,Hela/DDP細胞 小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-L1Betaine 50g/100g/1kg原裝 Sigma B2629

    細胞名稱 種屬8-羥基鹽shēng huà shì jì容量:RT100

    JAM2 Others Mouse 小鼠 JAM-2 / JAM-B 人細胞裂解液 (陽性對照) 4,4,4-亞基三本晴 4,4',4''-Mqthylidqnqtrisbqnzonitnilq 11340-31-6

    艾氏腹水瘤瘤株;Ehrlich4-甲基傘形酮酰-β-D-糖苷shēng huà shì jì容量:285

    人虹狀體上皮細胞 (HIPEpiC)( 5×105 )Paraffinoil石蠟油100AR,99%

    CM-M035小鼠肝動脈平滑肌細胞*培養基100mL73-24-5腺嘌呤;胰堿;腺堿;腺尿環;6-基尿環Adenine;6-AMiH-purine;6-AMino-3H-purine;6-AMino-9H-purine;1H-Purine-6-aMine;1,6-Dixy7no-6-iMinopurine;3,6-Dixy7no-6-iMinopurine

    EPD5 Others Human EPD5 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 鉭標準溶液(1000μg/ml)Tantalum standard質量規格:1000μg/ml

    CM-M049小鼠子宮內膜上皮細胞*培養基100mL碲標準溶液(1000μg/ml)Tellurium standard質量規格:1000μg/ml

    BxPC-3, 人原位胰腺腺癌細胞株 神經母細胞瘤細胞,LAN-5細胞 PA317(鼠胚胎成纖維細胞)鋱標準溶液(1000µg/mL,基體:10%HCl)Terbium standard質量規格:1000µg/mL,基體:10%HCl

    轉基因品系馬鈴薯SEMT15-102 PCR試劑盒小鼠肥大細胞瘤細胞;P815釩標準溶液(1000μg/ml,溶劑:0.5mol/L HNO3)Vanadium solution質量規格:1000μg/ml,溶劑:0.5mol/L HNO3

    CD5 Others Human CD5 人細胞裂解液 (陽性對照) 釔標準溶液(1000μg/ml in 10% HCl)Yttrium standard質量規格:1000μg/ml in 10% HCl

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