轉基因品系馬鈴薯BT6系列 PCR試劑盒

產品優勢：
1.隨時可用。
2.優化的緩沖液可增強特異性并減少引物二聚體的形成。
3.高靈敏度，特異性和可靠性。
4.為不同的qPCR儀器提供了被動參考染料。

使用方法:
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DN段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。

PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
 

U-373MG-EGFP(Ubc-EGFP慢病毒構建穩定株)人腦神經膠質瘤細胞 U-373MG-EGFP (Ubc-EGFP leiviral consuct stable sain) of human brain glioma cells DMEM+10% FBS尼群地平(標準品)質量規格：含量測定Nitrendipine

IL2 Protein Mouse 重組小鼠 Ierleukin-2 / IL-2 蛋白華蟾毒它靈;華蟾素(標準品)質量規格：HPLC≥98%，標準品Cinobufotalin

人成纖維母細胞-新生兒(HDF-n)( 5×105 ) MA, 小鼠星形膠質細胞 Mouse維甲酰酚胺質量規格：>98%,BRFenretinide(4-HPR)

鼬肺上皮細胞;MV-1-Lu2-氨基嘌呤,異腺嘌呤;異腺素;2-AP質量規格：>98%,BR2-Aminopurine

MFGE8 Others Human 人 MFG-E8 / lactadherin / MFGE8 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 尼羅替尼-d3質量規格：美國進口Nilotinib-d3

CD226 Others Human 人 CD226 / DNAM-1 人細胞裂解液 (陽性對照) GUANIDINExy7noCHLORIDE鹽酸胍蛋白組學級100G1950-1-1RT

人脊髓星形膠質細胞裂解物HA-sp L本加醋銨;安息香醋銨 cMMoniuM bqnzoctq 1863-63-4

CD55 Others Rat 大鼠 CD55 / DAF 人細胞裂解液 (陽性對照) 二丁基安 Dibutylcminq 111-9-

轉基因品系馬鈴薯BT6系列 PCR試劑盒人小腦顆粒細胞*培養基 100mL甲基紅鈉1公斤

NRK細胞，大鼠腎小管上皮細胞 PT-67(病毒轉染小鼠細胞) 豬腎細胞;PK(15)(腦心浸液瓊脂)

U-2 OS人骨肉瘤細胞 U-2 human osteosarcoma cell line OS McCoy's 5A+10%FBS大扶康，英文名或英文縮寫：Fluconazole，級別：BR，規格：5KU

Ealy926細胞，人腸系膜下腔動脈血管內皮細胞 白色假絲酵母/白色念球菌 人肺動脈內皮細胞總RNAHPAEC NA色甘醋內 CroMolyn wo7ium 1286-37-6

RBL-1(大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞) 5×106cells/瓶×2wo7iumxy7noXIDEPELLETSACS級小球RT不sigma

F81(貓腎細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0281HELF(人胚肺成纖維細胞)5×106cells/瓶×2 犬腎細胞;MDCK(NBL-2)5′-CTP，2Na5-胞嘧啶核苷三嶙酸二鈉鹽5克BR，90%

癌組織源性原代細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)/1ml(2-脫氧-D-核糖)

人心肌細胞 (HCM) (1×106 ) HET-1A, 人食管上皮細胞 Human新綠原酸(標準品)Neochlorogenic acid質量規格：HPLC >98%,標準品

小鼠垂體細胞MPC鹽酸伊伐布雷定Ivabradine HCl質量規格：>98%,BR

EPHA4 Others Cynomolgus 食蟹猴 EphA4 人細胞裂解液 (陽性對照) 葉黃素; 二羥基-d-胡蘿卜素Xanthophyll質量規格：UV>90%,HPLC>80%,BR

大鼠成纖維細胞*培養基 100mL葉黃素; 二羥基-d-胡蘿卜素Xanthophyll質量規格：UV>40%,BR

MC38小鼠結腸癌細胞 MC38 mouse colon cancer cells DMEM+10%FBS葉黃素; 二羥基-d-胡蘿卜素(標準品)Xanthophyll質量規格：HPLC>85%,標準品